產(chǎn)品名稱：MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶/ MMLV Reverse Transcriptase (RNase H^-)

產(chǎn)品濃度：200U/μl

貯存條件：-20℃保存，有效期二年。

產(chǎn)品說(shuō)明：逆轉(zhuǎn)錄酶能以RNA或單鏈DNA為模板起始合成互補(bǔ)的DNA鏈。MMLV Reverse Transcriptase (RNase H^-)是M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶的多點(diǎn)突變型，點(diǎn)突變?nèi)コ薘Nase H的活性中心，使RNase H的活性降低，減少了逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)中RNA的降解，并提高了酶的耐熱能力，50℃反轉(zhuǎn)錄時(shí)，保持了100%活性；更容易打開模板的高級(jí)結(jié)構(gòu)，使cDNA第一鏈的得率增加，更容易獲得全長(zhǎng)cDNA。

來(lái)源：E.coli 菌株，含有突變型莫洛尼氏鼠白血病病毒（M-MLV）逆轉(zhuǎn)錄酶基因。

活性定義：以Poly(A)為模板，Oligo (dT)為引物，在37℃條件下，10分鐘內(nèi)催化摻入1nmol的dTTP所需酶量定義一一個(gè)活性單位(U)。

產(chǎn)品應(yīng)用：第一鏈cDNA的合成；RT-PCR反應(yīng)。

儲(chǔ)存緩沖液：20 mM Tris-HCl (pH7.5)，200 mM NaCl，0.25 mM EDTA，0.01% NP-40(v/v)，2.5 mM DTT，50%甘油(v/v)。

產(chǎn)品純度： 200U的本酶和1μg的16S、23S rRNA在37℃下孵育1h，電泳條帶無(wú)肉眼可見(jiàn)的變化。

反應(yīng)緩沖液：[5×RT Buffer] 250mM Tris-HCl (pH 8.3)，15mM MgCl₂，375 mM KCl，50mM DTT。

推薦的反應(yīng)條件：

cDNA第一鏈的合成

1) 在無(wú)RNase的PCR管中加入：Oligo dT_12-18 (1μg/μl)或基因特異引物2-10pmol或隨機(jī)引物(50-250ng)1μl；Total RNA (10ng-5μg)或mRNA(1-500ng)xμl；dNTP (10mM each)1μl；DEPC ddOH₂ (14-x)μl。

2) 70℃保溫10分鐘后迅速冰浴2-10分鐘。

3) 離心數(shù)秒使反應(yīng)液聚集于PCR管底部。

4) 向上述反應(yīng)液中加入：5×RT Buffer 4μl；RNasin (40U/μl) 1μl；輕輕吸打混勻。

5) 50℃保溫2分鐘（Oligo dT_12-18或基因特異引物）；如果是隨機(jī)引物則25℃保溫10分鐘。

6) 加入1μl MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶，混勻后50℃保溫50分鐘。

7) 70℃ 保溫15分鐘后置冰上冷卻，得到cDNA。該產(chǎn)物可直接用于第二鏈的合成或RT- PCR擴(kuò)增反應(yīng)，保存請(qǐng)置于-20℃。