吸光度法測定酶的催化活性

基本的考慮因素。由于吸光度法技術(shù)上簡單可靠，所用儀器價格合理，因此是目前酶活 測定中首選的方法之一。 當(dāng)?shù)孜锘虍a(chǎn)物是有顏色的，或者是在紫外區(qū)有光吸收的，吸光度法就可以非?？焖俸头?nbsp;便地進(jìn)行，因為吸光產(chǎn)物的出現(xiàn)速率或者消失速率可以用分光光度法來跟蹤檢測。 催化活性z 對應(yīng)于每分鐘的吸光度的變化為： z=（△AV³100）/ε d△t 式中，V 是測量體積，L;t 是時間，min；z 的單位是mol/min，對英語前面章節(jié)里給出的國 際單位制U 的定義。

吸光光度法是基于物質(zhì)對光的選擇性吸收而建立起來的分析方法，包括比色法、可見及紫外吸光光度法及紅外光譜法。吸光光度法是采用分光器獲得純度較高的單色光，基于物質(zhì)對單色光的選擇性吸收測定物質(zhì)組分的分析方法。

吸光光度法的方法原理
吸光光度法是借助分光光度計測定溶液的吸光度，根據(jù)朗伯一比耳定律確定物質(zhì)溶液的濃度。吸光光度法是比較有色溶液對某一波長光的吸收情況。

吸光光度法的特點
A靈敏度高
一般吸光光度法所測定的下限可達(dá)10-5~10-6mol/L，因而有較高的靈敏度，適用于微量組分的分析。
B準(zhǔn)確度較高
吸光光度法的相對誤差為2%~5%，采用精密的分光光度計測量，相對誤差為1%~2%，其準(zhǔn)確度雖不如滴定分析法高，但已滿足微量組分測定的準(zhǔn)確度要求，而對微量組分的測定，滴定分析法是難以進(jìn)行的。
C簡便、快速
吸光光度法所使用的儀器——分光光度計，操作簡單，易于掌握。近年來，由于一些靈敏度高、選擇性好的顯色劑和各種掩飾不斷出現(xiàn)，?？刹唤?jīng)分離直接進(jìn)行吸光度分析，有效地簡化了測量步驟，提高了分析速度。
D應(yīng)用廣泛
幾乎所有的無機(jī)物和許多有機(jī)化合物都可直接或間接地用吸光光度法進(jìn)行測定。從外，該法還可用來研究化學(xué)反應(yīng)的機(jī)理，以及溶液的化學(xué)平衡等理論。如測定配合物的組成，弱酸、弱堿的理解常數(shù)等。由于有機(jī)試劑和配位化學(xué)的迅速發(fā)展及分光光度計性能的提高。吸光光度法已廣泛用于生產(chǎn)和科研部門。

酶制劑相關(guān)產(chǎn)品

吸光度測定方法
1、單一組分的測定
①比較法。比較法是先配制與被測試液濃度相近的標(biāo)準(zhǔn)溶液c（S）、被測試液c（X），在相同條件下顯色、定容后，測其相應(yīng)的吸光度為A和A（X），根據(jù)朗伯一比耳定律：
A（S）=ε(S)b(S)c(S) A(X)=ε(X)b(X)c(X)
由于同一物質(zhì)，用同一波長及相同厚度的吸收皿測定
ε(X)=ε(S) b(X)=b(S)
所以 A(S):A(X)=c(S):c(X)
即可求出待測試液的含量c(X)。
 
應(yīng)當(dāng)注意，進(jìn)行計算時，只有當(dāng)與相近時，結(jié)果才可靠，否則將有較大誤差
吸光光度法的特點是：因入射光是純度較高的單色光，故使偏離朗伯一比耳定律的情況大為減少，標(biāo)準(zhǔn)曲線直線部分的范圍更大，分析結(jié)果的準(zhǔn)確度較高。因可任意選取某種波長的單色光，故利用吸光度的加和性，可同時測定溶液中兩種或兩種以上的組分。由于入射光的波長范圍擴(kuò)大了，許多無色物質(zhì)，只要它們在紫外或紅外光區(qū)域內(nèi)有吸收峰，都可以用吸光光度法進(jìn)行測定。
②標(biāo)準(zhǔn)曲線法
2、高含量組分的測定——示差法
3、多組分的分析